基本情况及技术先进性

1)本研究利用高通量芯片检测不同进展期肝癌细胞和临床肝癌血清标本中miRNAs的表达，从中筛选出候选miRNAs，随后通过检测大样本血清中候选miRNAs的表达，发现miR-3126-5p对于诊断肝癌具有较好的灵敏度和特异性，尤其在诊断早期肝癌、AFP低表达的肝癌中具有较好的诊断价值。在此基础上，本研究开发了检测miR-3126-5p的引物、试剂盒及检测方法，具有较好的开发前景和临床应用价值。试剂盒由miRNAs抽提试剂、反转录试剂、特异性扩增引物以及PCR扩增所需试剂组成。

2)本研究结合肝癌细胞抵抗失巢凋亡的肝癌转移的细胞模型和临床血清样本，利用miRNAs表达谱芯片技术，分别比较伴有肝癌转移和未转移的肝癌患者血清miRNAs表达谱，以及处于转移状态和未转移状态的细胞模型，取两者交集，筛选得到了表达水平与肝癌转移与否密切相关的关键miRNAs。在此基础上利用Real-time PCR等技术检测大量临床样本血清中候选关键miRNAs的表达水平。随后采用SPSS 16.0软件分析发现：血清miR-107联合miR-1246诊断肝细胞癌转移优于AFP，具有较好的灵敏度和特异性，而且miR-107、miR-1246联合AFP诊断更优。对于低AFP水平的肝癌（AFP<200ng/ml）的转移诊断，miR-1246优于APF；miR-107联合miR-1246诊断明显优于APF；并且miR-107、miR-1246联合AFP更优。因此，miR-107联合miR-1246可以作为肝细胞癌转移的早期诊断标志物，用于肝细胞癌转移的早期诊断，具体应用时，检测待诊断患者外周血血清中miR-107、miR-1246的表达水平，对肝癌转移进行诊断。

3)本研究首次发现miR-424-5p是在转移性肝癌细胞中下调最明显的miRNAs之一，进一步证实miR-424-5p可以抑制肝癌细胞的转移，并降低肝癌细胞对失巢凋亡的抵抗，具有引起肝癌细胞细胞周期阻滞、抑制肝癌细胞增殖、侵袭、转移和克隆形成能力等作用。本项目研究为将miR-424-5p开发制备成为用于抑制转移性肝癌的药物奠定了良好的基础。相关研究成果已发表SCI收录论文，并获得国家发明专利授权。

综上所述，该项目的研究结果为临床转移性肝癌的早发现、早诊断和早治疗奠定基础。本项目所探索的通过外周血清中肝癌转移关键性miRNAs的检测进行肝癌转移早期预测的方法，创伤小、方法准确、应用方便，可在反复验证的基础上将其开发成为肝癌转移早期预测的标记物。相关研究成果已获得国家发明专利授权。

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