本发明涉及叶酸钙纳米颗粒的批量制备方法及诱导神经干细胞分化为胆碱能神经元的方法。本发明在超声下,将CaCl2溶液滴加至反应液中,在叶酸与CaCl2的反应过程中施加频率为40 55kHz的超声,使叶酸与CaCl2充分反应,在反应过程中无副产物生成并且产率高,方法简单高效,可以批量生产,一次性可以获得十几克产物,反应物简单无毒,无其他副产物且容易清洗。制备的叶酸钙纳米颗粒粒径均匀且尺寸较小,可以被细胞吞噬,有良好的生物相容性,可用于细胞实验。并且通过叶酸钙纳米颗粒调控神经干细胞定向分化,使用方便,可以直接加入细胞培养基或者植入材料内部使用。可以促进神经干细胞向成熟的胆碱能神经元分化。