本发明公开了一种利用双酶级联重组大肠杆菌催化木糖醇生物合成L 木糖的方法,是合成木糖醇 4 脱氢酶基因和L 海藻糖异构酶基因,构建重组质粒pET28a xdh/L fucI继而构建重组菌株、利用获得的重组菌株E.coliBL21(DE3) pET28a xdh/L fucI作为生物催化剂催化廉价底物木糖醇生产L 木糖。本发明方法实现了在大肠杆菌中同时表达XDH和L FucI酶,通过离心的方式即可容易地得到细胞催化剂,不需要额外对酶进行纯化或是固定化等耗时耗力的操作,反应条件温和、操作简单、生产效率高且成本低,反应液中L 木糖的浓度达到52.2g/L,L 木糖的转化率为65%。本发明为木糖醇生产L 木糖提供了一种替代方法,具有显著的工业应用潜力和应用前景。