本发明公开了一种N 糖基转移酶突变体AaFQ,是对来源于嗜沫凝聚杆菌中的N 糖基转移酶基因经过S274A、Q468A、P496R三点突变获得,其基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示,编码的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明还公开了该突变体作为多肽糖基化修饰的工具酶在利用UDP Glc或UDP Gal或UDP Xyl将含有N X S/T序列的多肽进行糖基化形成糖肽或糖蛋白中的应用。实验证实本发明的突变体AaFQ相较野生型NGT糖基化效率显著提高,利用UDP Glc、UDP Gal和UDP Xyl的能力显著增强,能够实现简单快速的利用UDP Glc/UDP Gal/UDP Xyl将含有N X S/T序列的多肽进行糖基化修饰,并可进一步利用其他的糖基转移酶对糖肽的糖链进行修饰获得目的糖肽。这为多肽与蛋白的糖基化修饰提供了一种新途径,为糖蛋白疫苗的合成提供了一种简便方法。