本发明涉及一种微生物转谷氨酰胺酶的重组生产方法。该重组生产方法是将成熟MTG编码基因与前导肽Pro编码基因分别构建重组质粒,将重组质粒转化入同一宿主细胞内共表达,初步纯化后获得有活性的微生物转谷氨酰胺酶。本发明将MTG前导肽Pro与Trx蛋白融合后表达为“分子伴侣”Trx Pro,与成熟MTG蛋白共表达时辅助MTG正确折叠,并抑制其对重组表达宿主细胞的伤害,实现了微生物转谷氨酰胺酶的有效可溶性表达及一步法简便纯化,在经一步法简单纯化后得到初步纯化蛋白,再经反应试剂进一步处理,高效剥离“分子伴侣”Trx Pro,得到高纯度高活性的重组转谷氨酰胺酶,具有应用于药用蛋白修饰等方面的重要价值。