本发明属于分子生物学技术领域,涉及单细胞的分泌蛋白、细胞质mRNA和核内DNA的检测芯片及方法。一种用于同一个单细胞分泌蛋白、细胞质mRNA和核内DNA的同步检测芯片,该芯片包括阀门控制层、检测层和基底;所述的阀门控制层设置在所述检测层的上方,基底设置在检测层的下方,所述的检测层包括若干个单细胞检测单元、总进样口、进样微流道、出样微流道和总出样口,所述总进样口与进样微流道连接,总出样口与出样微流道连接,每个单细胞检测单元分别与进样微流道和出样微流道连接。本发明的有益效果是:每个检测单元可以进行同一个单个细胞细胞核gDNA、细胞质内mRNA和细胞分泌蛋白的多重信息获取与检测;每个芯片可以同时进行多个单细胞操作,而且试剂消耗量少,成本低,准确度高。